Ámbito de aplicação do sistema de estratificação de separação de cromatografia líquida de baixa pressão: bioquímica, química sintética, produtos naturais, desenvolvimento de medicamentos, química alimentar, agroquímica, cosméticos, polímeros e petroquímica. Pode ser realizada estratificação de troca iônica, estratificação de afinidade, estratificação de filtragem em gel, estratificação hidrofóbica e outros métodos, para proteínas, enzimas, ácidos nucleótidos, nucleótidos, polipéptidos, (com / sem aminoácidos aromáticos) e qualquer outra análise de separação e detecção de fluxo de amostras biológicas / não biológicas com absorção ultravioleta, é a escolha ideal para purificação biomolécular, tem muitas funções, fácil de usar, econômica e outras características. O design compacto maximiza a economia de espaço para armazenamento frio e laboratório.

Observações

Os vários requisitos de indicadores técnicos do detector UV de feixe duplo de alto desempenho na configuração do sistema são usados ​​para testes quantitativos de fábrica de medicamentos em fábricas farmacêuticas nacionais. Características do equipamento

Determinação de comprimento de onda duplo de proteína 280nm/254nm

As moléculas de proteínas contêm aminoácidos aromáticos como tirosina e triana com ligações duplas conjugadas. Eles têm a propriedade de absorver a luz ultravioleta, seu pico de absorção no comprimento de onda de 280 nm, e o valor da densidade óptica do pico de absorção neste comprimento de onda é proporcional à sua concentração, por isso pode servir como base para a quantificação qualitativa e quantitativa de proteínas, por isso, o método de absorção ultravioleta de 280 nm é geralmente usado para o monitoramento contínuo da concentração de proteínas no sistema de estratificação. Mas como o conteúdo de tirosina e trônica em várias proteínas é diferente, para determinar a quantidade exata, é necessário ter a proteína pura a ser testada como padrão para comparar, ou já conhecer seu fator de dissipação como referência. Além disso, muitas substâncias não proteicas também têm capacidade de absorção determinada a comprimentos de onda de 280 nm, o que pode interferir. Os efeitos dos ácidos nucleicos (purina e pirimidina) são particularmente mais graves. A absorção a 280nm é 10 vezes mais forte (por grama) do que a proteína, mas

A absorção do ácido nucleico é mais forte em 254nm, com picos de absorção perto de 254nm. O fator de dissipação do ácido nucleico em 254nm é o dobro do que em 280nm, enquanto a proteína, ao contrário, absorve o UV de 280nm maior do que o valor de absorção de 254nm.

Normalmente.

Relação de absorção de luz para proteínas puras: A280/A254 1,8

Relação de absorção de luz do ácido nucleico puro: A280/A254 0,5

Portanto, quando os ácidos nucleicos estão presentes simultaneamente em soluções de proteínas (o que acontece na maioria dos sistemas biológicos), a OD254nm deve ser medida simultaneamente com a OD280nm. Em seguida, a quantidade real de proteína é calculada com base na relação entre a absorção de ambos os comprimentos de onda, corrigida por fórmulas empíricas para eliminar o efeito do ácido nucleico.

Concentração de proteína: 1,45 x A280-0,74 x A254 (mg/ml)

Esta fórmula experimental foi estabelecida a partir de uma série de dados medidos por uma mistura de proteínas (enolase de levedura) e ácidos nucleicos (ácido nucleico de levedura) em diferentes proporções de concentração conhecidas.

Configuração do sistema