Detector ultravioleta DWD-1 (comprimento de onda duplo de feixe duplo de alto desempenho) Processamento de dados incorporado

Faixa de comprimentos de onda: 254nm, 280nm (detecção simultânea), e também entre as linhas espectrais de 254nm, 280nm-400nm para detecção simultânea de dois comprimentos de onda opcionais.

* Características do instrumento DWD-1

Determinação de comprimento de onda duplo de proteína 280nm/254nm:

As moléculas de proteínas contêm aminoácidos aromáticos como tirosina e triana com ligações duplas conjugadas. Eles têm a propriedade de absorver a luz ultravioleta, seu pico de absorção no comprimento de onda de 280 nm, e o valor da densidade óptica do pico de absorção neste comprimento de onda é proporcional à sua concentração, por isso pode servir como base para a quantificação qualitativa e quantitativa de proteínas, por isso, o método de absorção ultravioleta de 280 nm é geralmente usado para o monitoramento contínuo da concentração de proteínas no sistema de estratificação. Mas como o conteúdo de tirosina e trônica em várias proteínas é diferente, para determinar a quantidade exata, é necessário ter a proteína pura a ser testada como padrão para comparar, ou já conhecer seu fator de dissipação como referência. Além disso, muitas substâncias não proteicas também têm capacidade de absorção determinada a comprimentos de onda de 280 nm, o que pode interferir. Os efeitos dos ácidos nucleicos (purina e pirimidina) são particularmente mais graves. A absorção a 280nm é 10 vezes mais forte (por grama) do que a proteína, mas o ácido nucleico é mais absorvido a 254nm, com seu pico de absorção perto de 254nm. O fator de dissipação do ácido nucleico em 254nm é o dobro do fator de dissipação em 280nm.

Por outro lado, a absorção ultravioleta de 280 nm é maior do que a absorção de 254 nm.

Normalmente.：

Relação de absorção de luz de proteínas puras: A280/A254 1,8

Relação de absorção de luz do ácido nucleico puro: A280/A254

Portanto, quando os ácidos nucleicos estão presentes simultaneamente em soluções de proteínas (o que acontece na maioria dos sistemas biológicos), a OD254nm deve ser medida simultaneamente com a OD280nm. Em seguida, a quantidade real de proteína é calculada com base na relação entre a absorção de ambos os comprimentos de onda, corrigida por fórmulas empíricas para eliminar o efeito do ácido nucleico.

Concentração de proteína: 1,45 x A280-0,74 x A254 (mg/ml)

Esta fórmula experimental foi estabelecida a partir de uma série de dados medidos por uma mistura de proteínas (enolase de levedura) e ácidos nucleicos (ácido nucleico de levedura) em diferentes proporções de concentração conhecidas.